做新藥仿制藥研發過程中工藝占很大比重，做工藝較多的同學們都會遇到這樣的問題，我好不容易把產品合成出來瞭，結果純度達不到要求，一個純化占據瞭大部分的研發時間，面對主管領導期盼的雙眼、猙獰的面孔，恨不得能化身超體中的女神斯嘉麗進入分子位面用手抓出雜質扔進垃圾堆。然而，“老實幹活去”同事“小輝輝”一巴掌拍醒瞭我- -！

說正事，常用的純化主要分為重結晶純化及其它純化；其它純化包含的內容比較多，比如打漿、過柱、吸附等。

1. 實驗室主要重結晶純化操作

先說說重結晶，重結晶一般操作為冷卻結晶、溶析結晶（也叫反溶劑結晶）、蒸發結晶、熔融結晶等，前兩種屬於溶液結晶的內容，而熔融結晶主要在分離異構體等文獻中較多，可憐我就知道手性拆分，到現在還沒接觸過熔融結晶。

1.1冷卻結晶：將待純化產品加入某一溶劑中加熱至溶清後再降溫析晶的過程稱為冷卻結晶。

常說的冷卻重結晶一般操作為將粗品與適當的溶劑加熱至溶解，趁熱過濾（如不需要除機械雜質則該步略去），降溫析晶，過濾幹燥。冷卻結晶應該是大傢使用最多的瞭，這一條中包含溶劑選擇的原則相信同學們接觸的也最多，我就少水點字數吧。

選擇適宜的溶劑是重結晶的關鍵之一，適宜的試劑應符合下述條件：

• 與被提純的化合物不起化學作用（這句是廢話）。
• 化合物應易溶於熱溶劑中，而在冷溶劑中幾乎不溶；反向也有，沒接觸過。
• 對雜質的溶解度應很大或很小。
• 能得到較好的晶體，當然無定型也有，有時還得多加個轉晶型過程。
• 溶劑的沸點適中。過低則溶解度改變不大，難分離，操作也困難；過高則溶劑不易除去造成溶劑殘留超標。
• 單一溶劑優先，三類溶劑優先，操作安全優先（避免低閃點溶劑）。

在選擇溶劑時應根據“相似相溶”的一般原理。溶質往往易溶於其結構相似的溶劑中。一般來說，極性的溶劑溶解極性的固體，非極性的溶劑溶解非極性的固體。在實驗中往往要通過很多次實驗才能確定使用哪一種溶劑（好像也是廢話）。

一句話，重結晶溶劑的選擇一般原則是對粗產品的熱溶解度大，冷溶解度小，對雜質溶解性冷熱都大或者冷熱都小，產品在重結晶溫度下穩定性要好；溶劑的沸點不宜過高或過低，主要利用產品與雜質在不同溶劑中溶解度的差異選擇目標溶劑。

1.2反溶劑結晶：將待純化產品用某一良溶劑溶解，再向其中加入不良溶劑析出產品的過程。

反溶劑結晶也稱作抽提結晶，多用於制藥行業。反溶劑結晶法是將良溶劑（也稱為正溶劑）與不良溶劑(即反溶劑)結合使用，通過添加不良溶劑降低待結晶物在溶劑中的溶解度達到析晶純化的目的。

反溶劑結晶有兩個原則：①正反溶劑要相溶，②待重結晶物溶於正溶劑，不溶於或微溶於不良溶劑。

反溶劑結晶說起來簡單輕松，但實際操作起來也挺復雜，一是正反溶劑的選擇要經過大量篩選；二是正反溶劑的用量，良溶劑不能太多不然產品損失大，不良溶劑的量也很頭疼，加多瞭沒純化效果，加少瞭損失又太大，還是要多做用量篩選。

1.3蒸發結晶：將待純化產品溶解後自然揮發或蒸除大部分溶劑以析出產品的過程。

說到蒸發結晶，不得不提起一段悲傷的回憶，當年組長讓我把化合物溶瞭旋蒸純化下，當時我是一臉的呆傻，這特麼咋純化，然後糾結瞭半天問組長咋做（為啥糾結？我覺得組長太醜），組長直接發過來十幾篇結晶文獻讓我仔細看，完瞭還特麼抽查學習成果- -！

說正事，蒸發結晶一般是待純化物溶瞭後通過旋蒸或常壓蒸餾去除大部分溶劑，過程中會優先析出純度較高的產品，待剩餘溶劑較少後直接抽濾，大部分雜質會隨著母液一起分離。另外晶型研究中可用於單晶培養、無定型晶種制備等，就是把化合物溶清過濾後靜置緩慢揮發。

2. 常用其他純化操作

2.1打漿純化

這個沒什麼說的，就是找到利用雜質和產品在某一溶劑中溶解度的不同進行打漿除雜，打漿操作一般以去除液體反應殘留物料或難幹燥溶劑較多。

2.2柱層析純化

上面還說有一把40米大刀呢，這會兒又提到柱層析瞭，不過我臉皮厚，盡管批評我吧！

說實話，做新藥及仿制藥滿打滿算四年多瞭，原料藥工藝中需要過柱的隻見過一次，唯一的那個項目也僅是過快速柱除雜的思路。不能否認柱層析的純化效果，但是原料藥項目如果使用柱層析純化會消耗大量溶劑產生大量的廢液，其生產成本太高。所以研究階段應盡量避免柱層析，實在繞不過去最好能改用過快速柱法純化。

2.3成鹽及解離、更改鹽形式純化

將待純化產品在溶解狀態下成鹽後再解離，或改變產品鹽基用以去除大部分雜質的操作。

這一條手性拆分用的應該是最多的瞭。由於鹽形式的變化會顯著影響溶解度，因此這是另一種有用的結晶技術。舉例來說，目標化合物可能在所選溶劑中溶解度低。但成鹽後，它的溶解度顯著變大並能完全溶解。冷卻和反溶劑結晶都可以得到純的目標化合物的鹽。另一種情況是，目標化合物能溶解在所選溶劑中，而成鹽後在此溶劑中的溶解度低。

2.4酸堿析晶純化

將待純化產品調酸堿後溶於水中，再反向調PH析出產品的過程。該方法對於易溶於水的雜質去除效果極佳。

2.5活性炭或矽膠或矽藻土吸附純化

活性炭吸附、矽膠吸附除雜主要操作為將待純化產品在某一溶劑中加熱溶清後再加活性炭或矽膠，攪拌一定時間後趁熱過濾，母液降溫析晶即可。其中活性炭及矽膠的添加量一般是1-5%。該純化法能去除吸附性較好的雜質，還能順便脫個色。當然，如果矽膠或活性炭對產品的吸附性也很好，那收率就會降低好多。

矽藻土其主要成分與矽膠類似，常用於溶清待純化產品抽濾前的鋪墊。一般的操作為將待純化產品溶清後，將矽藻土或矽膠鋪墊於漏鬥上再進行抽濾，其實說白瞭就是一個過快速短柱的辦法，該方法對大極性雜質及鈀等重金屬的去除效果較好，至於其它雜質那得看它心情瞭。

2.6制備分離（正反相制備或HPLC制備）

制備分離一般是利用液相收集特定峰，常用於雜質研究過程。

這一條絕對是合成人員的最愛瞭，雜質研究過程中因為分離及合成的雜質量都比較少，要將雜質提純最好的方法莫過於制備分離瞭，樣品送給分析人員然後坐等雜質分離收集好豈不美滋滋。條件好的公司一般都會配備，沒條件的？那隻能手動過小柱子瞭。

2.7薄層色譜分離

一句話，刮小板或刮大板（你懂的），一般在雜質研究及制備中常用，畢竟一塊大板最多也就塗20mg待分離產品。

2.8蒸餾和精餾操作

蒸餾是一種分離液體混合物的方法；精餾是多次簡單蒸餾的組合。精餾是蒸餾的一部分，一般用於幾個組分的分離，主要是異構體分離。其實吧可以簡單點理解，有回流操作的蒸餾是精餾，沒有回流的隻是蒸餾。

說到蒸餾，真的是比過柱子純化效果還好，可惜局限性太大。常用於油狀中間體的純化。

2.8幹燥（鼓風、真空、凍幹）

沒錯，幹燥也是純化的一種手段，有效的幹燥方式能將溶劑殘留控制在標準范圍內，比較難以去除的溶劑如甲苯、乙腈等，其質量標準中限度都很低，烘幹方式、溫度、時長等都會對去除效果有很大影響，所以對幹燥條件的考察也很重要。

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