稻瘟病孢子菌液的準備

水稻育種中,對稻瘟病的抗性研究,需要在抽穗期進行菌液的接種。菌液的制作過程主要使用以下培養基,後附詳細制液過程。

1.PDA培養基制作

材料準備:土豆300g、瓊脂條30g、D(+)-葡萄糖一水30g、錐形瓶

制作過程:

(1)土豆切片放入水中煮爛、4層紗佈過濾留液體,加入瓊脂條、葡萄糖定容至1.5L。滅菌鍋滅菌,分裝。

(2)常溫保存,使用時微波爐加熱。

2.玉米粉稻秸稈瓊脂培養基制作

材料準備:玉米粉12g、瓊脂條6g、稻秸稈7.5g、無菌水

制作過程:以上物品在圓錐瓶內準備好,加水攪拌定容至300ml。滅菌鍋3小時滅菌。


菌的活化-拓繁-產菌液

1.斜面活化 一周

設備準備:超清工作臺、培養箱、酒精燈、接種棒、試管、橡皮塞、紗佈(棉花)塞、記號筆、橡皮筋

試劑準備: PDA培養基

過程:

1.消毒殺菌:超清工作臺紫外線燈殺菌約15分鐘。雙手酒精消毒,鉤針3次酒精燃燒消毒。

2.一種菌兩個斜面活化,記號筆試管上記錄型號、日期。操作過程中試管口距離酒精燈不超過5cm,保證無菌環境,完成轉管後分別用橡皮塞、紗佈塞進行封口。每轉一次管,接種棒消毒一次。

3.6-8個試管一捆綁,培養箱25℃無光培養一周。

4. 每個斜面可擺放2-4個月,時間長需進行轉管。馬克筆記錄品種及活化時間。

2.擴繁

準備材料:PDA培養基(每個培養皿約20ml不到)、一次性培養皿、封口膜

3.產孢 7-8天

材料準備:隔熱手套、打孔器、玉米粉稻秸稈瓊脂培養基(簡稱產孢培養基)、培養皿、馬克筆、紗佈

詳細過程:

1.產孢培養基滅菌鍋滅菌後,將培養基倒入培養皿,操作過程均在酒精燈附件實施,培養基冷卻後準備轉菌塊。每個擴繁平板約可轉菌塊30個培養皿。

2.擴繁培養皿打孔器打孔,挑3-4個菌塊至產孢培養皿。

3.倒置擺放,所有轉移完成後,封口,培養箱用紗佈包裹25℃無光培養。

4.洗菌絲 3-5天

材料準備:培養皿、黑室(紫外線先照5-10分鐘殺菌)、黑光燈、油畫筆

過程:

1.無菌水洗掉灰白色菌絲。(平板會存在其他菌的污染的情況,註意識別)

2.平板半打開晾幹,晾幹後蓋上,照黑光燈3-5天誘發產孢,用油畫刷將菌孢刷下

3.在顯微鏡下觀看,一個蓋玻片下孢子數量X100,觀看5個點的孢子數量,平均每個點30-50個。收集好後用紗佈過濾裝瓶(礦泉水瓶),田間針筒打入抽穗株穗頸內,每株10ml。

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