1.PDA培養基制作
材料準備:土豆300g、瓊脂條30g、D(+)-葡萄糖一水30g、錐形瓶
制作過程:
(1)土豆切片放入水中煮爛、4層紗佈過濾留液體,加入瓊脂條、葡萄糖定容至1.5L。滅菌鍋滅菌,分裝。
(2)常溫保存,使用時微波爐加熱。
2.玉米粉稻秸稈瓊脂培養基制作
材料準備:玉米粉12g、瓊脂條6g、稻秸稈7.5g、無菌水
制作過程:以上物品在圓錐瓶內準備好,加水攪拌定容至300ml。滅菌鍋3小時滅菌。
菌的活化-拓繁-產菌液
1.斜面活化 一周
設備準備:超清工作臺、培養箱、酒精燈、接種棒、試管、橡皮塞、紗佈(棉花)塞、記號筆、橡皮筋
試劑準備: PDA培養基
過程:
1.消毒殺菌:超清工作臺紫外線燈殺菌約15分鐘。雙手酒精消毒,鉤針3次酒精燃燒消毒。
2.一種菌兩個斜面活化,記號筆試管上記錄型號、日期。操作過程中試管口距離酒精燈不超過5cm,保證無菌環境,完成轉管後分別用橡皮塞、紗佈塞進行封口。每轉一次管,接種棒消毒一次。
3.6-8個試管一捆綁,培養箱25℃無光培養一周。
4. 每個斜面可擺放2-4個月,時間長需進行轉管。馬克筆記錄品種及活化時間。
2.擴繁
準備材料:PDA培養基(每個培養皿約20ml不到)、一次性培養皿、封口膜
3.產孢 7-8天
材料準備:隔熱手套、打孔器、玉米粉稻秸稈瓊脂培養基(簡稱產孢培養基)、培養皿、馬克筆、紗佈
詳細過程:
1.產孢培養基滅菌鍋滅菌後,將培養基倒入培養皿,操作過程均在酒精燈附件實施,培養基冷卻後準備轉菌塊。每個擴繁平板約可轉菌塊30個培養皿。
2.擴繁培養皿打孔器打孔,挑3-4個菌塊至產孢培養皿。
3.倒置擺放,所有轉移完成後,封口,培養箱用紗佈包裹25℃無光培養。
4.洗菌絲 3-5天
材料準備:培養皿、黑室(紫外線先照5-10分鐘殺菌)、黑光燈、油畫筆
過程:
1.無菌水洗掉灰白色菌絲。(平板會存在其他菌的污染的情況,註意識別)
2.平板半打開晾幹,晾幹後蓋上,照黑光燈3-5天誘發產孢,用油畫刷將菌孢刷下
3.在顯微鏡下觀看,一個蓋玻片下孢子數量X100,觀看5個點的孢子數量,平均每個點30-50個。收集好後用紗佈過濾裝瓶(礦泉水瓶),田間針筒打入抽穗株穗頸內,每株10ml。